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技术文章

血液维生素A高xiao液相色谱法定量检测试剂盒产品说明书

阅读次数:240次 发布时间:2022/11/17 16:45:24

 

主要用途

 血液维生素 A 高xiao液相色谱法定量检测试剂是一种旨在通过抗氧化处理和有机溶剂萃取,进而在高xiao液相 色谱仪和紫外光谱下 (325nm波长) 检测分析,分离出维生素 A 即视黄醇波峰,以定量测定样品中维生素 A 含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于人体、动物等血液 (血 浆、血清) 样品中维生素 A 及其衍生物,例如视黄醇 (retinol)、视黄醛 (retinaldehyde )、视黄酸 (retinoic acid)、3-脱氢视黄醇 (3-dehydroretinol;vitamin A2) 、维生素 A 棕榈酸酯 (retinol palmitate) 和维生素 A 乙酸酯 (retinol acetate) 的检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。

技术背景

  视黄酸类 (retinoid) 是维生素A (Vitamin A) 及其相关衍生物的统称,其中包括视黄醇 (retinol)、视黄醛 (retinaldehyde)、视黄酸 (retinoic acid) 等。维生素A的结构形式包括视黄醇 (vitamin A1)及其酯类、3- 脱氢视黄醇 (3-dehydroretinol;vitamin A2) 及其酯类,视黄醛、视黄酸、新维生素A (neovitamin A) 等。维生素A在肝脏脂肪组织里以酯类形式储存,维生素 A  棕榈酸酯 (retinol palmitate) 和维生素A乙酸酯 (retinol acetate) , 占5% ,而95%以水解形式,在体内循环。维生素A在维护动物和人体眼睛、呼吸和生殖 系统的上皮组织, 以及骨发育的正常功能方面起着主要作用。维生素A缺陷将导致眼球干燥症 (xerophthalmia)、皮肤异常、易发感染;维生素A中毒会出现困倦 (drowsiness)、颅压 (cranial pressure)增加、血钙过高 (hypercalcemia)、脱发、高胡萝 卜素血症 (hypercarotenemia) 等。通过抗氧化处理和有机 溶剂萃取,进而在高xiao液相色谱仪和紫外光谱下 (325nm波长) 检测分析,分离出维生素A ,即视黄醇波峰, 以定量分析维生素A的含量。

保存缓冲液 (Reagent A)、萃取液 A (Reagent B) 和标准液 (Reagent G) 在-20℃冰箱里,其余的保存在 4℃ 冰箱里,标准液 (Reagent G) 避免光照;试剂具有挥发性,注意密闭瓶盖;萃取液 B (Reagent C)、去干扰液 (Reagent D) 和流相液 (Reagent F) 具有腐蚀性,注意操作安全;有效bao证 3 月

 

用户自备

1.5 毫升离心管:用于样品处理和标准液配制的容器

2 毫升离心管:用于样品操作的容器

15 毫升锥形离心管:用于样品操作的容器 (微型) 台式离心机:用于样品处理

干式培养箱或离心浓缩仪:用于样品干化

高xiao液相色谱仪 (HPLC):用于定量测定

 

实验步骤

一、 样品准备

1) 血浆样品准备

1 .准备好 EDTA 抗凝管

2 .抽取 1 毫升血液,置于抗凝管里

3 .放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟,速度为 700g  (或 3000RPM ,例如 eppendorf 5415)

4 .小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管――此为血浆成分 (注意:避免触碰白色液体层)

5 .(选择步骤) 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存

6 .移取 500 微升血浆到 15 毫升锥形离心管

7 .加入 xx 微升缓冲液 (Reagent A),混匀

8 .加入 xx 毫升萃取液A (Reagent B)

9 .涡旋震荡 20 秒

10.加入 xx 毫升萃取液B (Reagent C)

11.涡旋震荡 1 分钟

12.放进台式离心机离心 5 分钟,速度为 1000g

13.移取 2 毫升上层液相到 2 毫升离心管

14.放进 40℃干式培养箱晾干或离心浓缩仪挥干

15.加入 xx 微升溶解液(Reagent E),混匀

16.即刻进行后续高xiao液相色谱分析

 

2)血清样品准备

1 .准备好不含抗凝剂的储存管

2 .抽取 1 毫升血液,置于储存管里

3 .室温下,静置 30 分钟,直至血液凝结

4 .放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟,速度为 2000g  (或 5000RPM ,例如 eppendorf 5415)

5 .小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管――此为血清成分 (注意:避免触碰白色液体层)

6 . (选择步骤) 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存

7 .移取 200 微升血清到新的 2 毫升离心管

8 .加入 xx 微升缓冲液(Reagent A),混匀

9 .加入 xx 微升萃取液 A (Reagent B)

10.涡旋震荡 20 秒

11.加入 xx 微升去干扰液(Reagent D)

12.涡旋震荡 1 分钟

13.放进台式离心机离心 5 分钟,速度为 8500g

14.移取 800 微升下层液相到 2 毫升离心管

15.放进 40℃干式培养箱晾干或离心浓缩仪挥干

16.加入 xx 微升溶解液 (Reagent E),混匀

17.即刻进行后续高xiao液相色谱分析

 

二、测定准备

1 .开启仪器预热 15 分钟

2 .根据下表设置高xiao液相色谱仪 (HPLC) 参数

 

 

参数

推荐三

补充说明

色谱柱

长度:15cm

直径:3.9mm

Waters 仪器或

Agilent 仪器

固定相

ODS

 

流动相

流相液 (Reagent F)

流速

2 毫升/分钟

 

注射容量

xx 微升

xx 微升至 xx 微升

检测

紫外

 

波长

325nm

 

柱温

30℃

 

峰值时间 (retention )

7 分钟

视黄醇 (retinol)

运行时间

20 分钟

参考

 

3 .使用流相液 (Reagent F) 运行 1 次 (30 毫升) , 以达到色谱柱均衡和温度稳定

 

三、  标准样品配制

1 .准备好 5 个 1.5 毫升离心管,标记为 1 至 5 号管

2 .分别加入 xx 微升溶解液 (Reagent E) 到 1 至 5 号管

3 .移取 xx 微升标准液 (Reagent G) 到 1 号管,混匀

4 .小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液 (Reagent G) 到 2 号管,混匀

5 .小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液 (Reagent G) 到 3 号管,混匀

6 .小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液 (Reagent G) 到 4 号管,混匀

7 .将 1 至 5 号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

管号

溶解液 (Reagent E)

标准液 (Reagent G)

标准视黄醇浓度

1

xx 微升

xx 微升

xx 微克/毫升

2

xx 微升

xx 微升 1 号管

xx 微克/毫升

3

xx 微升

xx 微升 2 号管

xx 微克/毫升

4

xx 微升

xx 微升 3 号管

xx 微克/毫升

5

xx 微升

0

0

 

四、色谱分析

1 .将上述配制的标准液 (Reagent G) 和待测样品放进 30℃培养箱预热

2 .每次 (每个样品) 注射 100 微升

3 .每次 (每个样品) 运行 10 至 20 分钟

4 .获得色谱波峰图:波峰面积 (peak area ) 或峰值,保存记录

5 .全部运行完成,使用适量的流相液 (Reagent F) 清洗色谱柱

 

五、计算含量

注意事项

1 .本产品为 20 次操作

2 .本产品可以用于视黄醇 ( retinol) 、视黄醛 ( retinaldehyde ) 、视黄酸 ( retinoic acid) 、3- 脱氢视黄醇 (3-dehydroretinol;vitamin A2)、维生素 A  棕榈酸酯 (retinol palmitate ) 和维生素 A 乙酸酯 (retinol acetate ) 等的检测

3 .本产品检测范围是 0.3 至 50 毫克/升

4 .操作时,须戴手套

5 .试剂具有挥发性,注意密闭瓶盖或使用封口膜

6 .样品建议新鲜采集,避免溶血

7 .萃取液 B  (Reagent C)、去干扰液 (Reagent D) 和流相液 (Reagent F) 具有腐蚀性,注意操作安全

8 .色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等

9 .用户可以使用已知浓度的标准液 (Reagent G) 作为内参标准加入到样品中,检测回收率 (recovery)

10.维生素 A 的 HPLC 参考图谱如下

11.维生素 A 及其衍生物的出峰时间 (retention) 以用户操作时,使用的标准液 (Reagent G) 实际出峰为 准

12.本公司提供系列维生素检测试剂产品

 

质量标准

1 .本产品经鉴定性能稳定

2 .本产品经鉴定检测敏感

 

使用承nuo

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承nuo”的宗旨为我们的用户提供优zhi产品和服务。用户收到货后, 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保zheng 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式 (实验报告) 与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致,本公司不承担由此造成的损失。


友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ,  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。


订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS19066.2. 1

通用型维生素 A 高xiao液相色谱法定量检测试剂盒

20 次

G&VS19066.2.2

血液维生素 A xiao液相色谱法定量检测试剂盒

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G&VS19066.2.3

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