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技术文章

通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒2022动态已更新

阅读次数:187次 发布时间:2022/11/17 16:54:22

主要用途

  通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以 X-Gal 为底物,通过组织/细胞内β-半乳糖 苷酶在酸性条件下稳定表达,催化生成深蓝色的沉积产物,从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作 为细胞复制性衰老 (replicative senescence)的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞、活 体组织以及冰冻组织切片检测。产品即到即用,性能稳定,参数优化,着色敏感。


技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期,表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征,尤其在酸性条件下,细胞内β-半乳糖苷酶活性增加,而成为细胞衰老的生物 学标记。


产品内容

清理液(Reagent A)

固定液(Reagent B)

酸性液(Reagent C)

稀释液(Reagent D)

染色液(Reagent E)

产品说明书

 

保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;稀释液(Reagent D)和染色液(Reagent E) 用铝箔封裹,避免光照;有效保zheng6月


用户自备

2 毫升离心管:用于配制染色工作液

15 毫升锥形离心管:用于配制染色工作液

恒温培养箱:用于染色孵育

切片仪:用于石蜡或冰冻切片

光学显微镜:用于观察染色后的细胞

 

实验步骤

一、细胞染色

 

操作一、25cm2 细胞培养瓶染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D)到2毫升离心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作: 

1 .小心抽去25cm2 细胞培养瓶里的培养液

2 .小心加入xx毫升清理液(Reagent A),清洗生长中的细胞表面

3 .小心抽去清理液

4 .小心加入xx毫升固定液(Reagent B),覆盖整个生长表面

5 .在室温下孵育5分钟

6 .小心抽去固定液

7 .小心加入xx毫升酸性液 (Reagent C),清洗细胞表面

8 .小心抽去酸性液

9 .重复实验步骤7和8两次

10.小心加入xx毫升预热的染色工作液,覆盖整个细胞表面

11.放进37℃培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发)

12.在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β-半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色

 

操作二、24 孔细胞培养板染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取 xx 毫升稀释液 (Reagent D)到15毫升锥形离心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混匀后,放进 37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

 

1 .小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2 .每孔加入xx微升清理液(Reagent A),清洗生长中的细胞表面

3 .小心抽去每孔里的清理液

4 .每孔加入xx微升固定液(Reagent B),覆盖整个生长表面

5 .在室温下孵育5分钟

6 .小心抽去固定液

7 .每孔加入xx微升酸性液(Reagent C),清洗细胞表面

8 .小心抽去酸性液

9 .重复实验步骤7和8一次

10.每孔加入xx微升预热的染色工作液,覆盖整个细胞表面

11.放进37℃培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发)

12.在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β-半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色

 

二、冰冻切片染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D)到15毫升锥形离心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

1 .准备10片待测的厚为5至10微米的冰冻切片

2 .置于室温下,小心加上xx微升预冷的清理液 (Reagent A),铺满整个切片表面

3 .小心移去切片上的清理液 (Reagent A)

4 .小心加上xx微升预冷的固着液(Reagent B),铺满整个样品表面

5 .室温下孵育10分钟

6 .小心移去切片上的固着液(Reagent B)

7 .小心加上xx微升酸性液(Reagent C),铺满整个切片表面

8 .室温下孵育5分钟

9 .小心移去切片上的酸性液(Reagent C)

10.重复实验步骤7至9二次

11.小心加上xx微升预热的染色工作液,铺满整个切片表面

12.在37℃湿润培养箱里,孵育3至24小时,或组织细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发)

13.小心移去切片上的染色工作液

14.小心加上xx微升清理液(Reagent A),铺满整个切片表面

15.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

16.放上盖玻片或封片

17.即刻在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β-  半乳糖苷酶活性的地方,呈现蓝色

 

三、全组织染色

实验开始前,将试剂盒里的染色液 (Reagent E)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取 xx 毫升稀释液 (Reagent D)到15 毫升离心管,加入xx微升染色液 (Reagent E) ,混匀后,放进暗室里, 室温下,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

1 .准备 1 个 6 孔细胞培养板

2 .放进新鲜切除的动物组织样本 (注意:建议组织大小为0.5 厘米厚,1 厘米长;如果过大,*hao刀切处 理一下)

3 .将组织压平

4 .小心加入 xx 毫升清理液(Reagent A),清洗组织样本

5 .小心抽去清理液

6 .小心加入 xx 毫升固定液(Reagent B),浸没整个组织

7 .在 4℃条件下孵育 2 小时

8 .小心抽去固定液

9 .小心加入 xx毫升酸性液(Reagent C),清洗组织样本

10.在室温下孵育 15 分钟

11.小心抽去净化液

12.重复实验步骤 9 至 11 一次

13.小心加入 xx 毫升染色工作液,浸没整个组织

14.放进 37℃培养箱,孵育 16 小时,避免光照

15.后续石蜡切片 (6 微米厚) 或冰冻切片 (10 微米厚)

16.在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β-  半乳糖苷酶活性的组织细胞为阳性细胞,呈现蓝色

 

注意事项

1 .本产品为 100 次 (4 个 24 孔板和冰冻切片)、20 次 (20 个 25cm2 细胞培养瓶) 或 10 次 (全组织) 操 作

2 .操作时,须戴手套

3 .本产品的参数:固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到*you

4 .使用时,避免污染母液,否则出现絮状沉淀,影响实验效果

5 .染色工作液避免光照

6 .原始组织大小可以 1 厘米厚、2 厘米长进行染色,但建议越小越佳

7 .用户根据实际需求,按比例配制试剂用量

8 .细胞β-半乳糖苷酶活性强,孵育 3 小时即显示阳性;细胞β-半乳糖苷酶活性弱,则需要孵育 24 小时

9 .细胞染色*长孵育时间为 24 小时

10.本产品染色敏感,尤其对于微弱酶活性仍然可以检测,用户可以根据情况调整染色时间和染色工作液 浓度,使染色恰到好处

11.孵育时避免液体蒸发

12.细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方

13.全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限

14.染色后的细胞样品可以在 4℃冰箱里长qi保存,同样须避免光照

15.本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm 培养皿,和各种培养孔板,须相应 调整处理液:

16.本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

 

质量标准

1 .本产品经鉴定性能稳定

2 .本产品经鉴定着色敏感

 

使用承nuo

  极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承nuo”的宗旨为我们的用户提供优zhi产品和服务。用户收到货后, 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保zheng说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式 (实验报告) 与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致,本公司不承担由此造成的损失。


友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ,  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS10012. 1

细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

100/250 次

G&VS10012.2

全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

10 次

G&VS10012.3

冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

50 次

G&VS10012.4

通用型组织细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

10/ 100 次

G&VS80056. 1

细胞衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

50 次

G&VS80056.2

全组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

10 次

G&VS80056.3

冰冻切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

50 次

G&VS80056.4

石蜡切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒

50 次

G&VS10037. 1

细胞β-半乳糖苷酶化学发光法定量检测试剂盒

20 次

G&VS10037.2

细胞β-半乳糖苷酶比色法定量检测试剂盒

20 次

 

原创作者:上海极威生物科技有限公司

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