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RNA 荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒操作步骤
阅读次数:2005次 发布时间:2022/12/26 15:04:11
一、 测定准备
1. 准备好待测样品,置于冰槽里
2. 设定好荧光分光光度仪:激发波长 485±10nm,散发波长 530±12.5nm,并置零
3. 实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出 xx 微升稀释液(Reagent B)到新的 1.5 毫升离心管,加入 xx 微升染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液(5 次测定量),放在暗室里。然后进行下列操作。
二、 构建标准曲线
1. 准备好 5 个 1.5 毫升离心管,标记为 1 至 5 号管
2. 分别加入 xx 微升稀释液(Reagent B)到每个离心管
3. 移取 xx 微升标准液(Reagent C)到 1 号管,混匀
4. 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液(Reagent C)到 2 号管,混匀
5. 小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液(Reagent C)到 3 号管,混匀
6. 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液(Reagent C)到 4 号管,混匀
7. 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表
管号 稀释液(Reagent B) 标准液(Reagent C) 标准 DNA 总量
1 xx 微升 xx 微升 xx 纳克/毫升
2 xx 微升 xx 微升 1 号管 xx 纳克/毫升
3 xx 微升 xx 微升 2 号管 xx 纳克/毫升
4 xx 微升 xx 微升 3 号管 xx 纳克/毫升
5 xx 微升 空对照 0
8. 移取 xx 微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液到新的比色皿
9. 加入 100 微升上述配制的标准液
10.室温下,孵育 5 分钟,避免光照
11.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
12.重复实验步骤 8 至 11 四次
13.绘制标准曲线:纵座标(Y 轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X 轴)为 DNA 含量(纳克/毫升)
三、 样品检测
1. 移取 xx 微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液到新的比色皿
2. 加入 100 微升待测样品
3. 室温下,孵育 5 分钟,避免光照
4. 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
5. 根据标准曲线获得样品对应 RNA 含量(纳克/毫升)
注意事项
1. 本产品为 25 次操作,包括标准曲线测定
2. 整个操作须带手套,建议使用滤芯枪头,并格外小心,防止降解 RNA
3. 建议所有的操作用品属于 RNA 专用
4. 使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过 2 小时,且注意避光
5. 孵育时,避免光照
6. 系统检测,标准曲线测定 1 次即可;如果仪器更换,则需要重新测定 1 次
7. 如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量
8. 盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖不会干扰检测3
9. 如果样品中含有 DNA,建议使用 5 单位 DNA 酶,37℃孵育 90 分钟预处理
10.本公司提供系列 RNA 检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定高度敏感
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS20129 RNA 荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒 20 次
G&VS20129A 染色液(Reagent A) 微升
G&VS20129B 稀释液(Reagent B) 毫升
G&VS20129C 标准液(Reagent C) 毫升
试剂盒订购信息
产品编号 产品名称 规格
G&VS12046 DEPC 水 500 毫升
G&VS12047 DMDC 水 500 毫升
G&VS20016.1 DEPC 处理试剂盒 100 次
G&VS20016.2 DMDC 处理试剂盒 100 次
G&VS12039.1 RNA 样品储存液 50 毫升
G&VS12039.2 纯化 RNA 样品储存液 50 毫升
G&VS20101 mRNA 纯化树脂再生试剂盒 20 次
G&VS20127 RNA 比色法定量检测试剂盒 20 次
G&VS20129 RNA 荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒 20 次
原创作者:上海极威生物科技有限公司
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