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植物组织蔗糖含量微量法检测试剂盒说明书
阅读次数:1772次 发布时间:2022/12/26 15:12:16
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂 10mg×1 支,4℃保存,临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,用水稀释 10 倍,备用,即1mg/mL;
试剂二:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂 0.5g×1 瓶,常温保存。
产品介绍:
蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标。先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。酸性条件下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。
操作步骤
一、样品制备:
称取0.1g 样本,常温研碎,加入0.5mL 提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于80℃水浴锅中10min,振荡3~5 次,冷却后,4000g,25℃离心10min,取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入0.5mL 提取液,4000g,25℃离心10min,取上清液测定。
二、测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂(µL) 空白管 标准管 测定管
样本 25
试剂一 25
蒸馏水 25
试剂二 15 15 15
混匀,100℃煮沸 5min 左右(盖紧,防止水分散失)
试剂三 175 175 175
试剂四 50 50 50
混匀,沸水浴反应 10min 左右,冷却后取 200µL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm 处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。
三、蔗糖含量计算:
1、按照蛋白质含量计算
蔗糖含量(mg/mg prot)= (C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr此法需要自行测定蛋白浓度。
2、按照样品质量计算
蔗糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
C 标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.025mL;V2:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
原创作者:上海极威生物科技有限公司
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