人KIT Ligand（KITLG）ELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人KIT Ligand（KITLG）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人KIT Ligand（KITLG）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

ELISA试剂盒操作步骤：

使用前将试剂盒置于室温（20-30℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

1、加50μl的标准品或处理好的样品到各自的微孔板中， 再加50μl呋喃西林代谢物抗体工作液到微孔板中，25±2℃下暗处孵育30分钟。

2、弃去孔中的液体，并在吸水纸上拍干，每孔注满稀释好的浓缩稀释液，轻轻振荡，放置半分钟，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复4次。

3、加入酶标记二抗100μl每孔，25±2℃下暗处孵育30分钟，然后洗板（重复步骤2）

4、显色液A和显色液B各加50μl到微孔中，并在25±2℃暗处孵育15分钟。

5、加50μl终止液到微孔板中，在450nm处测量吸光度值（建议用双波长450/630nm检测），必须在加入终止液后5分钟内读取吸光度值。

ELISA试剂盒的组成：

1、96孔酶标板：12条*8孔（包被有偶联抗原）.

2、呋喃西林代谢物标准液6瓶：1ml /瓶， :

0ppb, 0.05ppb， 0.15 ppb，0.45ppb，1.35 ppb，4.05ppb

3、呋喃西林代谢物抗体工作液： 7ml   

4、酶标记二抗：       12ml

5、显色液A：         7ml     

6、显色液B：          7ml     

7、终止液：            7ml    

8、浓缩洗涤液（需20倍稀释）：  25ml

9、浓缩复溶液（需10倍稀释）：  25ml   

10、衍生化试剂：      10ml

ELISA实验需要准备的试剂及溶液配制：

1). 1M盐酸（取1毫升浓盐酸，加入11毫升纯水混合）

2). 1M氢氧化钠（称取1克氢氧化钠溶于25毫升纯水）

4). 0.1M磷酸氢二钾溶液（称取0.228克磷酸氢二钾三水合物溶于10毫升纯水）

5).乙酸乙酯

6).正己烷

7)用蒸馏水20倍稀释浓缩洗涤液。

8)用蒸馏水10被稀释浓缩复溶液。

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