人B细胞活化因子（BAFF;CD257）ELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人B细胞活化因子（BAFF;CD257）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人B细胞活化因子（BAFF;CD257）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

抗体类型

单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA，实际上有时候二者结合效果更好。例如，对于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。

双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体（不论多抗还是单抗）的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与检测抗体竞争抗原上的同一位点，为此我们就需要确保捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。如果捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突，就会对实验结果产生较大影响。要避免这一问题，我们可以选择购买“matched pair”的捕获/检测抗体对，这些打包在一起的抗体是商家经过验证才推荐的好组合。

ELISA检测试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、对照品

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

原创作者：上海极威生物科技有限公司