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关于CIK细胞的培养原理#技术文章

阅读次数:269次 发布时间:2022/12/28 14:39:59

 【培养原理】

CIK培养用细胞因子和抗体:

细胞到货处理

观察:

1、收到细胞后,请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养

瓶是否有破损或漏液等异常情况。 处理:

1、75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。

2、显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40x,100x,200x 各一张)前

三天照片为重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。

3、不要打开培养瓶盖,将细胞放入 37 度培养箱中静置 3-4 小时后再做处理,以稳定细胞状

态。

4、收到细胞后,及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态,并按常规贴壁或悬浮细胞

的传代方法操作。

nCD3激发型单抗:

T细胞活化的第yi信号来自于T细胞表面的受体,即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合,也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体,在T细胞表面,其与CD3分子通过非共价键结合,形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集,进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等),促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白,从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等),*终通过激活转录因子,使其进入细胞核内,结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等),引起基因的表达和转录,T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。

由上可见,CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后,可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化,进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活,从而使T细胞增殖和活化。也就是说,CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程,从而引起T细胞的增殖与活化,因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。 

贴壁:未超过 80%汇合度时,将瓶装的wan培养液收集至离心管中,留 5ml wan培养基放入 37℃、5%CO2 孵箱培养;超过 80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。shou次传代,建议 1:2 传代(两个 T25)。(传代时建议一瓶用原瓶里面的wan培养基,另外一瓶用自己配的wan培养基,进行对比培养。)

特殊细胞注意事项:个别细胞贴壁不牢,在运输过程中发生细胞脱落,这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管,1000rpm 离心 5min,收集上清(后期对比培养使用),沉淀加入胰酶 1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化 1-2 分钟后,加 5ml wan培养基终止反应。再离心,弃上清,加 1-2ml wan培养基重悬。然后按 1:2 比例进行分瓶传代(两个 T25),补充新的wan培养基至 5-8ml/瓶,zui后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。

(注意:如收到密封培养瓶,处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松)

CIK细胞,即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-Induced Killer,CIK)是一种新型的免疫活性细胞,CIK增殖能力强,细胞毒作用强,具有一定的免疫特性。由于该细胞同时表达 CD3 和 CD56 两种膜蛋白分子,故又称为NK 细胞(自然杀伤细胞)样 T 淋巴细胞,兼具有 T 淋巴细胞强大的抗瘤活性,和 NK 细胞的非 MHC 限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强,如同 “ 细胞导弹 ” ,能jing确 “ 点射 ” 肿瘤细胞,但不会伤及 “ 无辜 ” 的正常细胞。

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