ELISA检测以灵敏度较高、特异性较好等特点在食品安全检测中得到广泛的应用，但在操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大。如不注意，有可能导致显色不wan全、花板、检测无效等结果。所以实验过程中应注意选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作。在ELISA操作过程中，同时做好室内质控、室间质评，认真做好各项检验记录，才能bao证ELISA检测质量。

一、样品的保存

    用于ELSIA检测的样本非常广泛，包括各种动物组织、动物体液以及其他食品提取物等。有些样本可以直接通过简单离心、稀释，有些则需要经过理化方法进行提取。检测样品应bao证新鲜，经前处理的提取液应及时进行检测，时间越长，提取液中的抗原的效价越低。如不及时检测，应及时放4℃冰箱保存。防止细菌污染，因菌体中可能含有内源性HRP，可能会导致假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的HRP可能发生聚合，在间接法ELSIA检测中可使本底加深。所以标本如需保存做多次检测，宜采用少量分装冰箱保存。组织样本若不及时做处理，应该放置-15℃冰箱保存。

二、试剂的准备

    严格按照试剂盒的说明书的要求准备好需要用到的试剂。LEISA检测中应采用蒸馏水或者去离子水，洗涤用水应新鲜和高质量，注意查看是否需要和洗涤液进行稀释。自配的缓冲液应用PH计测量校正。从冰箱取出的试剂必须与室温平衡方可使用。试剂盒中本次试验不需要的试剂部分及时放回冰箱保存。

使用方法
1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤1：
双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于 450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

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