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ELISA标本如何制备和贮存?

阅读次数:1374次 发布时间:2018/6/8 13:42:32

   检测可溶性蛋白:根据产品说明书制备血清、血浆标本,由于有些样品对温度敏感极易丧失活性,应尽快分离并分装(一般300500ul/管),大多数标本收集和实验在同一天应贮存在28℃。若无法立即测定,应贮存在-70℃,标本贮存时间一般不宜过长,避免反复冻融。使用前将标本平衡至室温,融化标本严禁使用水浴锅。冻存后或冷藏时间过长的标本可能会出现沉淀或小凝集块,应在实验前离心或过滤(0.45um滤膜)标本,体积少的标本不建议过滤。所有标本的收集要使用无菌管,在无菌/半无菌条件下操作防止污染。

  血清:将血液在室温凝集1015分钟,1500g离心2030分钟,小心吸取血清。

  血浆:按试剂盒中的说明书选择抗凝剂。收集血液时,轻轻摇动试管使抗凝剂与血液充分混合。将血液在室温保存 1015分钟,1500g离心1520分钟,小心吸上层血浆。

  尿液:将尿液收集在无菌的容器内。1500g离心1015分钟或过滤(0.45um滤膜)去除杂质。注意:对于尿液标本实验的回归系数可能发生变化。

  细胞培养上清液:1500g离心1015分钟去除细胞和细胞残渣。若使用常规典型的培养基,应制备两条标准曲线,一条使用标准品稀释液/或实验缓冲液配制标准品,另一条以细胞培养基配制标准品。若两条标准曲线的变化范围在10%内,实验结果可用任一曲线分析。

检测细胞相关和细胞内蛋白:细胞相关蛋白和其它细胞内蛋白在ELISA实验前需要对标本进行处理将目的蛋白释放出来。

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