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总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS 快速法)-价格/说明-极威生物

阅读次数：4370次　发布时间：2021/1/14 10:00:59

总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS 快速法)-价格/说明-GIVEI生物

总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS 快速法)，即 Total Antioxidant Capacity Assay Kit with a Rapid ABTS method ，简称 T-AOC Assay Kit ，是种采用 2,2＇-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid(ABTS)作为显色剂，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物 (antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行快速检测的试剂盒。

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和 DNA 等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。

机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。

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植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。 ABTS 法测定总抗氧化能力的原理是，ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS+，在抗氧化物存在时 ABTS+的产生会被抑制，在 414nm 或 734nm 测定 ABTS+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox 是种维生素 E 的类似物，具有和维生素 E 相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如，Trolox 的总抗氧化能力为 1，相同浓度情况下，其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和 Trolox 相比的倍数来表示。 Antioxidant ABTS+ ——————> ABTS 本试剂盒方便快捷，加入待测样品后 6 分钟即可进行吸光度测定，通常 10-20 个样品可以在十多分钟内检测完毕。

本试剂盒可以检测 100 个样品。

包装清单：

产品编号产品名称包装

S0121-1 检测缓冲液 20ml

S0121-2 ABTS 溶液 1ml

S0121-3 过氧化氢溶液 0.5ml

S0121-4 过氧化物酶 0.2ml

S0121-5 Trolox 溶液(10mM) 0.1ml

— 说明书 1 份

保存条件：

-20℃保存，年有效。其中 S0121-2 ABTS 溶液和 S0121-5 Trolox 溶液(10mM)需避光

保存。

注意事项：

样品中不能添加 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质，也不宜添加 Tween、Triton和 NP-40 等去垢剂。测定时需可以测定 A414 的酶标仪台(测 405-425nm 也可以)或可以测定微量样品的分光光度计台。ABTS 对人体有刺激性，请注意适当防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴次性手套操作。

总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS 快速法)-价格/说明-GIVEI生物
使用说明：

1. 过氧化氢溶液和过氧化物酶的稀释，以及 ABTS 工作液的配制：

(1) 用双蒸水把过氧化氢溶液稀释 1000 倍。例如取 10 微升过氧化氢溶解，加入到 9.99ml双蒸水中，混匀即为 1/1000 过氧化氢溶液。

(2) 根据待测样品的数量，取适量过氧化物酶用检测缓冲液稀释 10 倍。例如取 20 微升过氧化物酶，加

入到 180 微升检测缓冲液中，混匀后即可配制成 200 微升过氧化物酶工作液。过氧化物酶工作液宜新鲜配制使用。

(3) 参考下表，根据待测定样品的数量(含标准曲线)配制适量的 ABTS 工作液：

1 个检测 5 个检测 10 个检测 20 个检测

检测缓冲液 152 微升 760 微升 1520 微升 3040 微升

ABTS 溶液 10 微升 50 微升 100 微升 200 微升

1/1000 过氧化氢溶液 8 微升 40 微升 80 微升 160 微升

ABTS 工作液 170 微升 850 微升 1700 微升 3400 微升

注意：ABTS 工作液配制后，室温避光保存，宜在 30 分钟内使用完毕。

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2. 待测样品的准备：

(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品的准备：

血清、血浆、唾液或尿液样品每个样品需要 10 微升，都可以直接用于测定。血清、血浆、唾液或尿液样品都可以使用新鲜样品进行测定，也可以-80℃冻存后再进行测定。-80℃冻存的样品至少在个月内所测定获得的数据没有显著变化。注意：血浆制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝。根据文献报道，人血清或血浆中的总抗氧化能力为 0.5-2mM，人唾液中的总抗氧化能力为 0.3-1mM，人尿液中的总抗氧化能力为 0.2-3mM。

(2) 细胞或组织样品的准备：
对于细胞样品，收集约 100 万个细胞(不必精确计数，直接刮下，不宜使用胰酶和 EDTA消化)，放置在 200 微升冰冷的 PBS 或 HBSS 溶液中，匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物，4℃约 12000g 离心 5 分钟，取上清用于后续测定。对于组织样品，每 20mg 组织加入 100微升冰冷的 PBS或 HBSS 溶液，匀浆或超声以充分破碎组织并释放其中的抗氧化物，4℃ 约 12000g 离心 5 分钟，取上清用于后续测定。以上所有操作均需在 4℃或冰上操作。制备好的细胞或组织样品的上清如果不立即用于测定，可以在-80℃冻存。-80℃冻存的样品至少在个月内所测定获得的数据没有显著变化。细胞或组织样品在测定总抗氧化能力时需同时测定蛋白浓度，后测定获得的总抗氧化能力通常表示为每毫克或每克蛋白重量中的总抗氧化能力，表示单位为 mmol/mg 或mmol/g。

(3) 其它样品的准备：

植物或中草药抽提液都可以直接用于检测。需注意样品本身的颜色不会干扰检测。植物或中草药

抽提液的抗氧化能力可以表示为每毫克或每克抽提物干重中的总抗氧化能力，表示单位为mmol/mg 或 mmol/g。各种抗氧化物测定其抗氧化能力时，通常配制成 0.15-1.5mM，然后进行测定。抗氧化物的浓度可以以摩尔浓度表示时，测定获得的总抗氧化能力可以用相对总抗氧化能力进行表示，例如 0.5mM 的某抗氧化物其测定获得的 OD 值和 1mM 的 Trolox 测定获得的 OD 值相同，则其相对总抗氧化能力为2，再如0.2mM的某抗氧化物其测定获得的OD值和1mM的Trolox测定获得的 OD值相同，则其相对总抗氧化能力为 5。根据文献报道和实际测定结果，维生素 C 的抗氧化能力为1.0，维生素 E 的抗氧化能力为 1.0，GSH 的抗氧化能力为 1.3，Uric acid 的抗氧化能力为 1.0，β-Carotene 的抗氧化能力为 2.6，Lycopene 的抗氧化能力为 3.1，Quercetin 的抗氧化能力为3.0，鲜橙汁的总抗氧化能力为 2.2。

3. 标准曲线测定的准备：

用蒸馏水或样品配制溶液稀释标准品。对于血清、血浆、唾液或尿液样品直接用蒸馏水或PBS 稀释标准品，对于细胞或组织样品，用于细胞或组织匀浆的溶液稀释标准品，其它样品则用样品

配制溶液对标准品进行稀释。把 10mM Trolox 标准溶液稀释成 0.15、0.3、0.6、0.9、1.2 和 1.5mM。

4. 总抗氧化能力的测定：

(1) 96 孔板的每个检测孔中加入 20 微升过氧化物酶工作液。

(2) 空白对照孔中加入 10 微升蒸馏水或 PBS 等适当溶液；标准曲线检测孔内加入 10 微升各种浓度的Trolox 标准溶液；样品检测孔内加入 10 微升各种样品。轻轻混匀。

(3) 每个孔内加入 170 微升 ABTS 工作液，轻轻混匀。

(4) 室温孵育 6 分钟后测定 A414。如果测定 A414 有困难，也可以在 405-425nm 范围内进行测定。

(5) 根据标准曲线计算出样品的总抗氧化能力。如果样品测定出来的吸光度在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。

(6) 总抗氧化能力的表示方式：在采用 Trolox 作为标准品进行总抗氧化能力检测时，样品的抗氧化能力可以用 Trolox-Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC)来表示。对于混合物例如血浆、血清、唾液或尿液等的抗氧化能力，可以直接用 Trolox 的摩尔浓度来表示，例如某样品测定获得的抑制率和 0.6mM 的 Trolox 相同，则该样品的总抗氧化能力为 0.6mM；再如某样品稀释 5 倍后测定获得的抑制率和 0.5mM 的 Trolox 相同，则该样品的总抗氧化能力为 2.5mM。对于细胞或组织裂解液等，例如某裂解液样品的蛋白浓度0.15mg/ml，测定获得的抑制率和 0.3mM Trolox相同，则该