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玉米赤霉烯酮酶联免疫反应测试盒-价格/说明-极威生物
阅读次数：3578次 发布时间：2021/1/14 14:25:23
玉米赤霉烯酮酶联免疫反应测试盒-价格/说明-GIVEI生物
玉米赤霉烯酮酶联免疫反应测试盒
1．概述
玉米赤霉烯酮 ELISA 检测试剂盒以竞争性酶联免疫反应为原理，定量检测谷类、饲料、干肉、干鱼、种子和牛奶中赤霉烯酮含量。玉米赤霉烯酮（ZEA）是由镰刀霉菌产生的种毒素。在 很多种谷类植物中都有玉米赤霉烯酮，例如：玉米、大麦、燕麦、小麦、水稻、高粱和植物油。它分离于合成代谢途径，作用类似于雌激素，可以导致动物繁育紊乱,ZON 检测 MRL 值为 500ppb.
玉米赤酶烯酮检测试剂盒可以为食品生产商、政府管理部门、质检部门提供可靠的玉米赤霉烯酮检测方法，满足消费者对食品安全的要求。该试剂盒有以下特点：
高回收率（＞80%）、快速提取（10-20 分钟）
高的交叉反应率：玉米赤霉烯酮（138%），α-玉米赤霉烯醇（91%），α-玉米赤霉醇（70%）
高的灵敏度（0.1ng/g 或者 ppb）
快速（小时左右完成检测）
高重复性
玉米赤霉烯酮酶联免疫反应测试盒-价格/说明-GIVEI生物
2．试剂盒原理
2．试剂盒原理
该试剂盒基于竞争性酶联免疫原理，抗原包被在酶标板孔内，分析过程中，样品和抗、酶标二抗加入微孔中，如果样品中有毒素抗原，就可竞争与抗体结合，阻止抗体与包被的抗原结合，酶标二抗可与抗结合从而与酶标板上包被的抗原结合。经酶催化底物发生反应颜色变化，颜色的深浅与毒素的浓度成反比。
3. 试剂盒组成
试剂盒内含有 96 孔板，可检测 42 个样品。剩余的酶标板重新放入铝箔袋中封口保存。试剂盒保存在 2-8℃，保质期为 12 个月。
试剂盒包括：
96 孔酶标板(Zearale Coated Plate) 12×8 孔
标准品(Standards)（0、0.1、0.25、0.5、1.5、4.5ng/ml） 6×0.8ml
回收用 25ng/ml (Spiking)（可选） 1×0.8ml
抗(Zearale Antibody #1) 1×8ml
1×酶标二抗(HRP-Conjugate Antibody #2) 1×8ml
20×浓缩洗液(Wash Solution) 1×28ml
终止液(S Buffer) 1×20ml
TMB 底物(TMB Substate) 1×12ml
本试剂盒应当在 2-8℃的温度下储存，1 个月内不用的试剂盒，请将标准品、抗、1×二抗存于-20℃或置于冰箱冷藏
4.样品检测下限
样品 检测下限 ng/g
干肉、鱼 1.0
谷类、饲料、种子 20
牛奶 1.0
植物油 1.0
5.交叉反应数据
药物 交叉反应率（%）
玉米赤霉烯酮(Zearale) 100
玉米赤霉酮(Zearala) 138
α-玉米赤霉烯醇(α-Zearalenol) 91
β-玉米赤霉烯醇(β-Zearalenol) 21
α-玉米赤霉醇(α-Zearalanol) 69
β-玉米赤霉醇(β-Zearalanol) 6
6．未提供的设备或材料
1)酶标仪（450nm）
2)恒温培养箱
3)组织匀浆器
4)涡旋振荡器
5)10、20、100、1000L 移液管
6)多道移液器：50-300L
7)甲醇
玉米赤霉烯酮酶联免疫反应测试盒-价格/说明-GIVEI生物
7.注意事项
7.注意事项
实验请阅读以下文字，以保证获得佳实验效果。
1)标准品含有玉米赤霉烯酮，谨慎使用
2)切勿使用过期的试剂盒
3)不同批次的试剂切勿混合使用，确保试剂稀释正确
4)实验室温度保持室温（22.5±2.5）°C。避免在通风厨下操作，那样溶液很容易受冷、受热、蒸发；避免在阳光直射的地方操作，那样溶液容易受热蒸发，孵育过程中，如果操作台温度低，即可在酶标板下铺几层纸巾或其他绝缘材料
5)确保您使用的是蒸馏水或去离子水
6)用移液器加液时，将枪头深入到微孔底部，接触到微孔材料
7)孵育时间尽量准确，加标准品时要保证量致，先加标准品后加样品
8)标准品滴加的浓度应由低到高，减少对标准曲线的影响
9)将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。
8．试剂的准备
所有的试剂在使用 1-2 小时将其回到室温，混匀。
（1）1×工作洗液
按 1：19 的比例配制浓缩洗液和蒸馏水。举例：取 10ml 的 20X 浓缩洗液加入到 190ml 双蒸馏水中，配制成 200ml 的 1X 工作洗液，按需要，可同比例放大或缩小。
（2）70%甲醇
按 70：30 的比例配制无水甲醇和蒸馏水，举例：取 70ml 无水甲醇加入到 30ml 蒸馏水中，配制成 100ml 的 70%甲醇，按需要，可同比例放大或缩小。
（3）35%甲醇
按 35：65 的比例配制无水甲醇和蒸馏水，举例：取 35ml 无水甲醇加入到 65ml 蒸馏水中，配制成 100ml 的 35%甲醇，按需要，可同比例放大或缩小。
9．样品的准备
先样品要保存适当。在 2-4°C 下样品只能放置 1-2 天，般长时间保存就要在-20°C 下冷藏，使用使样品恢复到室温。
干肉类/鱼
1. 样品磨碎混匀；
2. 取 5g 匀质样品放入干净的器皿中；
3. 加入 25ml 70%甲醇振荡 20 分钟；
4. 室温（22.5±2.5）°C 4000rpm 离心 10 分钟；
5. 取 1ml 上清液用 1ml 去离子水稀释；
6. 每孔加 50L 稀释后的上清液。
稀释倍数：10
谷类/饲料/种子
1.研磨粉碎具有代表性的样品(根据现有的取样技术)。
2.秤取 5g 粉碎均匀的样品，并将它们放入个合适的试管中。
3.加 25ml 35%的甲醇，震荡摇匀 5min。
4.离心 10min，4000r/min。
5.取 20L 上清液，加入 780L 35%的甲醇，混匀。
6.取 50ul 加入到酶标板的微孔中进行 ELISA 分析测试。
*注:稀释系数:200。如果需要增加样本容量,因此必须改变甲醇/水的体积,举例子,如果个 10g 的样品来用,50ml35%甲醇可以使用；如用户根据需要和条件称样可加倍或者减半，后面提取用到的试
剂相应的加倍或者减半，稀释倍数不变。特殊样品及高背景值样品稀释倍数可调至 500 倍。
牛奶
1. 脱脂牛奶，用 35%的甲醇以 1：9 将牛奶样品稀释（例如 20L 牛奶+180L 35%的甲醇），每孔取 50l 检测；
2. 含脂牛奶，4000rpm 离心 5 分钟，弃去上层脂肪，用 35%的甲醇将样品以 1：9 稀释（例如：20L +180L 35%的甲醇）, 每孔取 50l 检测；
稀释倍数：10
蔬菜/豆类/花生/橄榄油
（1） 称取 0.5g 样品，加入 2.5ml35%的甲醇；
（2） 涡流 10 分钟或高速涡流 3 分钟,静置 5 分钟或离心 3 分钟；
（3） 去掉上层脂肪液，取 100μL 下清液到新管，加 900μL 35%的甲醇，混匀 1min；
（4） 取 50ul 加入到酶标板的微孔中进行 ELISA 分析测试
稀释倍数：50
10．检测步骤
以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。
溶液 用量 24 个反应
抗 50L 1.2ml
二抗工作液 50L 1.2ml
工作洗液 1.0ml 24ml
终止液 100L 2.4ml
TMB 底物 100L 2.4ml
1)分别加入 50L 标准品或 50L 样品到所设定的孔中；
2)每孔加入 50L 1×二抗后加入 50L 抗，轻轻摇匀 1 分钟；
3)室温（22.5±2.5）°C 避光下孵育 30 分钟；
4)先倒掉微孔的液体，再加入 1×洗液 250L 洗板 3 次，后次洗板后将酶标板倒置在洁净纸巾上拍干，除去剩余水分；
5)各孔加入 100L TMB 底物，轻轻震荡 1 分钟，室温（22.5±2.5）°C 避光孵育 10 分钟；
6)加入 100L 终止液；
7)酶标仪 450nm 读板。
玉米赤霉烯酮酶联免疫反应测试盒-价格/说明-GIVEI生物
4．结果计算
4．结果计算
1) 以标准品的浓度和平均相对吸光值为横纵坐标做对数标准曲线
2) 相对吸光值（%）=标准品（或样品）吸光值/零标准吸光值×100
3) 根据样品的平均吸光值在标准曲线上确定对应的浓度
样品检测下限=0.1ppb×稀释倍数
样品定量下限=0.25ppb×稀释倍数
原创作者：上海极威生物科技有限公司
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