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葡萄糖含量试剂盒说明书@今日发布

阅读次数：3390次　发布时间：2021/5/21 14:29:17

葡萄糖含量试剂盒说明书

微量法

正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

测定原理：

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水

试剂的组成和配制：

试剂一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；

葡萄糖提取：

1、组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组

织，加入1mL蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。

3、其他类液体，离心后可直接取上清检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、混合试剂的配制：使用将试剂二和试剂三1:1等体积混合，用多少配多少。

3、加样表（在EP管或96孔板中加入下列试剂）：

试剂（μL）空白管标准管测定管

样本 20

试剂一 20

蒸馏水 20

混合试剂 180 180 180

混匀，置 37℃（哺乳动物）或25＇C（其它物种）保温15min 后，于505nm波长处读取吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为 A1、A2和 A3。空白管和标准管只要做一管。第 2页，共 2 页

葡萄糖含量计算：