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植物马铃薯病毒Y（PVY）ELISA检测试剂盒@操作注意事项
阅读次数：3408次 发布时间：2021/5/21 17:33:50
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
植物马铃薯病毒Y（PVY）ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物马铃薯病毒Y（PVY）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物马铃薯病毒Y（PVY）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判断样品是否含有植物马铃薯病毒Y（PVY）。
样品收集、处理及保存方法
1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3.细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在 2-8℃，使用室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的
浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解
后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.预处理后的样本无需稀释，直接取 10μL 加样即可。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用充分摇匀。
试剂盒组成
名称 96 孔配置 48 孔配置 备注
微孔酶标板 96 孔 48 孔 无
阴性对照 0.3mL 0.3mL 无
阳性对照 0.3mL 0.3mL 无
样本稀释液 6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物 A 6mL 3mL 无
底物 B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2 张 2 张 无
说明书 1 份 1 份 无
自封袋 1 个 1 个 无
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各 50μL；
3.待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；
4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。
结果判断
1.试验有效性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3.阴性判断：样品 OD 值＜临界值（Cutoff），样品为阴性
4.阳性判断：样品 OD 值＞临界值（Cutoff），样品为阳性
试剂盒性能
1.准确性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。
4.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6 个月
免责声明
1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担
原创作者：上海极威生物科技有限公司
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