技术文章

细胞ERK1/2激酶总活性光度法定量检测试剂盒抑制剂筛选

阅读次数：3341次　发布时间：2021/6/24 14:50:46

细胞ERK1/2激酶总活性光度法定量检测试剂盒抑制剂筛选

1．在96孔板上做好相应标记：背景、wan全活性和待测抑制剂样品

2．按下表加入试剂，进行样品预处理

内容物	空背景对照	样本背景	wan全酶活性	待测抑制剂酶活性
缓冲液（Reagent C）	20微升	20微升	20微升	20微升
阴性液（Reagent G）	20微升	10微升	10微升	——
待测抑制剂	——	10微升	――	10微升
用户自备的纯化酶	——	——	10微升（1毫单位）	10微升（1毫单位）
96孔板每孔总量	空背景对照孔（40微升）	样本背景孔（40微升）	wan全活性孔（40微升）	待测抑制剂样品孔（40微升）
轻轻摇动96孔板，混匀，放进30℃培养箱里孵育30分钟。然后进行下列操作

3．分别移取100微升缓冲液（Reagent C）到新的96孔板的所有孔里

4．分别加入20微升酶促液（Reagent D）

5．分别加入20微升反应液（Reagent E）

6．分别加入20微升底物液（Reagent F）

7．轻轻摇动96孔板

8．在30℃温度下孵育3分钟

9．加入40微升上述预处理的待测样品

10．即刻放进30℃酶标仪检测：测读30分钟

11．抑制活性计算：

1) [（wan全活性读数－空背景对照读数）－（抑制剂样品活性读数－样本背景读数）]÷（wan全活性读数－空背景对照读数）＝实际抑制百分率

2) IC50：50％抑制率所需的抑制剂浓度

X（所需抑制剂样品浓度）＝（已知抑制剂样品浓度÷实际抑制百分率）X 50％

3) 直接构建抑制曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD）；横座标（X轴）为已知抑制剂浓度

尊敬的客户：

您好！上海极威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，是一家专业从事“产品研发、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司。极威生物依托国内外技术研发人才的优势，由留美zi深科学家与数位国内多年从事生物领域研究的博士、硕士等高校生物领域研究人员共同创立，在科学研究和医疗检测领域享有极高的声誉，经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，长qi专注于生物领域，旗下产品种类众多。极威生物秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，致li于发展中国的科研事业。力求为我国生物科技事业提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。自公司成立以来，公司的销售额保持高速增长，企业规模不断扩大，研发产品包括elisa试剂盒，生化试剂盒，动物血制品，抗体，标准品，生化试剂，实验耗材等10万余种类，公司长qi致li于elisa试剂盒、生化试剂盒的研发，为客户提供生化试剂盒、ELISA试剂盒、技术服务等一系列实验代测服务。