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细胞ERK1/2激酶总活性光度法定量检测试剂盒酶标仪测定
阅读次数:3302次 发布时间:2021/6/24 14:53:11
1)样品总活性测定
1.在96孔板上做好相应标记:背景对照和样品
2.分别移取130微升缓冲液(Reagent C)到96孔板里
3.分别加入20微升酶促液(Reagent D)
4.分别加入20微升反应液(Reagent E)
5.分别加入20微升底物液(Reagent F)
6.轻轻摇动96孔板
7.在30℃温度下孵育3分钟
8.分别加入10微升阴性液(Reagent G)或待测样品(100微克细胞裂解悬液蛋白)到相应孔里(注意:样品须清澈)
9.轻轻摇动96孔板
10.即刻放进酶标仪检测:0分钟读数和5分钟读数
11.活性计算:
[(样品读数-背景读数)X样品稀释倍数X 0.2(体系容量;毫升)]÷[0.010(样品容量;毫升)X 6.22(毫摩尔吸光系数)X 0.5(光径距离;厘米)X 5(反应时间;分钟)]=单位/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=单位/毫克
单位=微摩尔NADH/分钟
或
[(样品读数-背景读数)X样品稀释倍数X 0.2(体系容量;毫升)]÷[0.10(样品蛋白量;毫克)X 6.22(毫摩尔吸光系数)X 0.5 (光径距离;厘米)X 5(反应时间;分钟)]=单位/毫克
单位=微摩尔NADH/分钟
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