检测开始前，移取20微升缓冲液（Reagent C）到1.5毫升离心管，分别加入10微升专性液（Reagent H）和待测样品（注意：100微克细胞裂解蛋白），混匀后，放进30℃培养箱里孵育30分钟。然后继续下列操作。 

1． 在96孔板上做好相应标记：待测样品

2． 移取100微升缓冲液（Reagent C）到96孔板里

3． 加入20微升酶促液（Reagent D）

4． 加入20微升反应液（Reagent E）

5． 加入20微升底物液（Reagent F） 

6． 轻轻摇动96孔板

7． 在30℃温度下孵育3分钟

8． 加入40微升上述预处理的待测样品

9． 轻轻摇动96孔板

10． 即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和5分钟读数

11． 活性计算：

[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X 0.2（体系容量；毫升）]÷[0.010（样品容量；毫升）X 6.22（毫摩尔吸光系数）X 0.5（光径距离；厘米）X 5（反应时间；分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克

单位＝微摩尔NADH/分钟 

或

[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X 0.2（体系容量；毫升）]÷[0.1（样品蛋白量；毫克）X 6.22（毫摩尔吸光系数）X 0.5（光径距离；厘米）X 5（反应时间；分钟）]＝单位/毫克 

单位＝微摩尔NADH/分钟 

1） 样品特异活性计算 

特异活性＝总活性－非特异活性

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