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细胞P38激酶总活性光度法定量检测试剂盒的技术背景
阅读次数:3384次 发布时间:2021/6/24 17:47:13
P38促分裂素原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinases;P38MAPK;EC2.7.11.24),又称为细胞分裂素特异性结合蛋白(Cytokinin Specific Binding Protein;CSBP),属于促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)一类中,包括JNK(c-Jun amino terminal kinase)、ERK(细胞外信号相关激酶;extracellular signal related kinase)、P38、Big MAPK1等的一员。
酵母的同源基因为Hog1p。在哺乳动物细胞中,促分裂素原活化蛋白激酶通路包含有三大通路,P38信号通路是其中。P38MAPK属于丝氨酸//苏氨酸(serine/threonine)蛋白激酶家属。和ERK、JNK通路一起,将细胞外信号转化为特定细胞反应。P38通路受到各种促炎性刺激(proinflammatory stimuli)例如生长因子、激素、GPCR配体、促炎性细胞因子白介素1和8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等,以及细胞应激(UV、渗透压休克osmotic shock、内毒素、热休克、化学毒素等)而活化,通过MAPK激酶3和6(MKK3和6)、Jun N-terminal kinase kinase1,以及与MAP3k7IP1/TAB1反应,获得磷酸化后,由胞浆转移到胞核,进而激活下游MK2、MK3、PARK、Mac、MSK、MNK1、转录因子(STAT1、NFAT、ATF2、MEF2C、P53、CHOP、MAX、CDC25B)、MnSOD等,达到调节促炎性细胞因子的转译、各种细胞外刺激的基因表达、细胞周期、分化、凋亡的调节、TNFα、IL1、COX2的生物合成等功能。
P38通路异常,将导致风湿性关节炎、炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)、银屑病(psoriasis)和癌症等,由此P38成为药物靶标。P38 MAPK蛋白激酶有5个亚酶,包括α(MAPK14/SAPK2A)、β(MAPK11)、γ(MAPK12/ERK6/SAPK3)、δ(MAPK13/SAPK4)、P38-2。其中P38α为广谱表达,由MAP激酶激酶(MKK)激活以及MAP3K7IP/TAB1蛋白反应后激活,其作用底物为ATF2、MEF2C、MAX、CDC2B、P53等,与细胞繁殖、分化、细胞周期、转录调节、炎性反应、细胞因子合成、发育(红细胞、胎盘)等有关;P38β为广谱表达,主要由MAP激酶激酶6(MKK6)激活,其作用底物为ATF2/CREB2;P38γ主要在骨骼肌组织表达,是成肌细胞(myoblast)分化为肌管(myotube)的信号传导者;P38δ在肺、胰腺、肾、小肠、睾丸等组织高表达,主要由MAP激酶激酶3和6(MKK3和6)激活,其作用底物为ATF2、Tau、Stathmin、eEF2K等,与角质形成细胞(keratinocyte)分化有关。P38磷酸化目标序列为IPTTPITTTYFFFKKK。基于底物IPTTPITTTYFFFKKK,在P38敏感性抑制剂SB220025(5-(2-Amino-4-pyrimidinyl)-4-(4-fluorophenyl) -1-(4-piperidinlyl)imidazole)的存在与否的情况下,受到P38激酶的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的变化(340nm),来定量分析P38激酶的总活性。
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