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细胞P38激酶总活性光度法定量检测试剂盒的实验步骤
阅读次数:3371次 发布时间:2021/6/24 17:55:23
一、 待测样品准备
1. 准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞(1至5 X 107细胞)
2. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A),覆盖生长表面
3. 小心抽去清理液
4. 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞(注意:避免使用胰酶消化)
5. 加入xx毫升清理液(Reagent A),混匀细胞
6. 移入到预冷的15毫升锥形离心管(注意:悬浮细胞从这一步骤开始)
7. 放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为300g
8. 小心抽去上清液
9. 加入xx至xx微升裂解液(Reagent B),充分混匀(注意:可以调节蛋白浓度)
10. 转移到预冷的1.5毫升离心管
11. 强力涡旋震荡15秒
12. 置于冰槽里孵育30分钟
13. 放进4℃微型台式离心机离心5分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
14. 小心移取100至500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-GMS30030.1)
16. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
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