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细胞PKC激酶活性光谱法定量检测试剂盒实验步骤

阅读次数:3395次 发布时间:2021/6/25 10:49:48

 细胞PKC激酶活性光谱法定量检测试剂盒实验步骤

 

一、待测样品准备

 

1、准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞(15 X 106细胞)

2、小心加入xx毫升清理液(Reagent A,覆盖生长表面

3、小心抽去清理液

4、使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞(注意:避免使用胰酶消化

5、加入xx毫升清理液(Reagent A,混匀细胞

6、移入到预冷的15毫升锥形离心管(注意:悬浮细胞从这一步骤开始

7、放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为300g

8、小心抽去上清液

9、加入xx微升裂解液(Reagent B,充分混匀

10、转移到预冷的1.5毫升离心管

11、强力涡旋震荡15

12、置于冰槽里孵育30分钟

13、放进4℃微型台式离心机离心5分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415

14、小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

15、移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-我司有售

16、即刻放进-70保存或置于冰槽里继续后续操作

 

 

 

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