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技术文章

石蜡切片TUNEL测定试剂盒产品说明书

阅读次数:6874次 发布时间:2023/11/9 17:52:23

 主要用途

石蜡切片TUNEL测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法,包括石蜡分离、无热性酶消解等完整步骤,从存档中的石蜡包埋的组织切片中探寻DNA断点,即运用修饰过的核苷酸,在末端脱氧核糖核酸转移酶TdT的帮助下,DNA单链或双链上断点处的3’末端进行标记,原位探测和定量分析单细胞水平的DNA降解状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的DNA降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌,即到即用,反应敏感,操作简捷,性能稳定。

 

技术背景

细胞凋亡,或细胞程序性死亡,在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中,起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的激活,DNA链在核小体间连接区切成缺口,使核内DNA断裂成小片断在组织细胞原位DNA切口处可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素dUTP,即TUNELTerminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling),然后通过与过氧化物酶缀合卵白素(Peroxidase conjugated avidin)的反应,由二氨基联苯胺(diaminobenzidineDAB)作用显示为棕色(过氧化物酶活性)。

 

产品内容

去石蜡液(Reagent A     150毫升

补水液AReagent B 50毫升

补水液BReagent C 50毫升

补水液CReagent D 50毫升

补水液DReagent E 50毫升

清理液(Reagent F 60毫升

酶解液(Reagent G500微升

终止液(Reagent H500微升

酶标液(Reagent I500微升

染色液(Reagent J500微升

显色液AReagent K500微升

显色液BReagent L 5毫升

强化液(Reagent M 50微升

产品说明书 1

 

保存方式

保存酶解液(Reagent G)、酶标液(Reagent I)、染色液(Reagent J)和显色液AReagent K)在-20℃冰箱里,严格避免反复冻融,其余的保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent J)和显色液AReagent K),避免光照;有效bao6

 

用户自备

小型染色缸:用于石蜡切片的去石蜡和染色操作

光学显微镜:用于细胞染色后观察分析

 

特别注意

1.酶标液(Reagent G)不能在室温下冻融,而必须在冰槽里冻融,冻融后即刻使用;严禁反复冻融;考虑分装,以备下次使用

2.显色液AReagent K显色液BReagent L)必须在实验操作前即刻混匀;混匀后切忌久放不用或储存后备用;用完扔掉

3.显色液AReagent K)如果出现沉淀,须过滤后再用

4.每次移取试剂,须更换枪头,以免污染母液,影响结果

5.石蜡包埋前,组织切片须用1%多聚甲醛或常规固定液4℃条件下,固定16小时,否则组织易脱落

 

实验步骤

一、 去石蜡处理

1. 取出10片待测的石蜡包埋的组织切片(注意:石蜡包埋前,组织切片须用1%多聚甲醛4℃条件下,固定16小时,此步很重要

2. 放进80℃烘箱,孵育30分钟

3. 室温下静置15分钟

4. 按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸

孵育时间

50毫升去石蜡液Reagent A

15分钟

50毫升去石蜡液Reagent A

15分钟

50毫升去石蜡液Reagent A

15分钟

50毫升补水液AReagent B

3分钟

50毫升补水液BReagent C

3分钟

50毫升补水液CReagent D

3分钟

50毫升补水液DReagent E 

3分钟

 

5. 小心移去切片上的补水液DReagent E

6. 小心加上200微升清理液(Reagent F在切片上,铺满整个切片样品表面

7. 室温下孵育5分钟

8. 小心移去切片上的清理液(Reagent F

二、蛋白消解处理

1. 小心加上50微升酶解液(Reagent G,铺满整个切片样品表面

2. 室温下孵育15分钟

3. 小心移去切片上的酶解液(Reagent G

4. 小心加上50微升终止液(Reagent H,铺满整个切片样品表面

5. 室温下孵育5分钟

6. 小心移去切片上的终止液(Reagent H

7. 室温下,将切片置入50毫升清理液(Reagent F中孵育5分钟

8. 小心移去切片上的清理液(Reagent F

 

三、 断点标记处理

1. 小心加上50微升含有酶标液(Reagent I,铺满整个切片样品表面

2. 37℃湿润的培养箱里,孵育1小时,保持湿润,避免干燥

3. 小心移去切片上的酶标液(Reagent I

4. 室温下,小心将切片置入50毫升清理液(Reagent F中孵育2分钟

5. 小心移去切片上的清理液(Reagent F

 

四、样本染色处理

在染色前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的显色液AReagent K置入冰槽里融化,然后移取200微升显色液AReagent K1.8毫升显色液BReagent L2毫升离心管,再加入10微升强化液(Reagent M,充分混匀,标记为显色工作液,置于暗室。然后进行下列操作:

1. 小心加上50微升染色液(Reagent J在切片上,铺满整个切片样品表面

2. 室温下孵育30分钟,避免光照

3. 小心移去切片上的染色液(Reagent J

4. 室温下,小心将切片置入50毫升清理液(Reagent F中孵育2分钟

5. 小心移去切片上的清理液(Reagent F

6. 小心加上100微升含有显色液AReagent K显色液BReagent L显色工作液,铺满整个切片样品表面

7. 室温下孵育530分钟,或直至样本出现棕褐色

8. 小心移去切片上含有显色液AReagent K显色液BReagent L显色工作液

9. 室温下,小心将切片置入50毫升清理液(Reagent F中浸泡5

10. 小心移去切片上的清理液(Reagent F

11. (选择步骤)进行甲基绿复染(注意:建议使用甲基绿复染试剂盒-G&VS40010

12. 放上盖玻片或封片

13. 即刻在一般光学显微镜下观察:阳性细胞呈现棕褐色

注意事项

1. 本产品为10次操作

2. 本产品为生物素标记,超过荧光素标记强度1000

3. 本产品无需POD转换,直接在光学显微镜下观察,既方便,又确保信号不受影响

4. 操作时须戴手套,以防污染

5. 石蜡包埋前,组织切片须用1%多聚甲醛或常规固定液4℃条件下,固定16小时,否则造成样品支离破碎

6. 酶标液(Reagent I温度敏感,严禁反复冻融

7. 清理液(Reagent F50毫升置于小型染色缸里,可重复使用

8. 所有操作在室温下进行,除酶标孵育外

9. 每次更换试剂溶液时,保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴,呈湿润状态,可见反光

10. 试剂溶液在切片表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满切片表面

11. 细胞显色,避免过度,密切目测观察,控制时间

12. 细胞显色完成后,即刻进行光学显微镜观察

13. 本公司提供系列细胞凋亡试剂产品

 

质量标准

1.本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定显色清晰

 

使用cheng

极威生物秉着信誉至上、客户满意、质量cheng的宗旨为我们的用户提供you产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,bao说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

 

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10022.3石蜡切片TUNEL测定试剂盒10/20

G&VS10022.3A 去石蜡液(Reagent A500 毫升

G&VS10022.3B 补水液AReagent B500毫升

G&VS10022.3C 补水液BReagent C500毫升

G&VS10022.3D 补水液CReagent D500毫升

G&VS10022.3E 补水液DReagent E500毫升

G&VS10022.3F 清理液(Reagent F500毫升

G&VS10022.3G 酶解液(Reagent G5毫升

G&VS10022.3H 终止液(Reagent H10毫升

G&VS10022.3I 酶标液(Reagent I 5毫升

G&VS10022.3J 染色液(Reagent J10毫升

G&VS10022.3K 显色液AReagent K10毫升

G&VS10022.3L显色液BReagent L90毫升

G&VS10022.3M强化液(Reagent M10毫升

 

试剂盒订购信息 

产品编号

名称

规格

G&VS10022.1

细胞TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒

10/20

G&VS10022.2

冰冻切片TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒

10

G&VS10022.6

石蜡切片TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒

10

G&VS10022.4

细胞TUNEL荧光法(Fluorescein)测定试剂盒

10

G&VS10022.5

冰冻切片TUNEL荧光法(Fluorescein)测定试剂盒

10

G&VS10022.6

石蜡切片TUNEL荧光法(Fluorescein)测定试剂盒

10

G&VS10022.7

细胞TUNEL比色法定量检测试剂盒

10/50

 

原创作者:上海极威生物科技有限公司

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