主要用途

冰冻切片组织 TUNEL 测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法， 包括固着、封阻、通透等完 整步骤，从存档中的冰冻组织切片中探寻 DNA  断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转 移酶 (TdT) 的帮助下，对 DNA 单链或双链上断点处的3’末端进行标记，原位探测和定量分析单细胞水 平的 DNA  降解状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要 适用于冰冻组织切片的 DNA 降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌， 即到即用， 反应敏感， 操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞凋亡， 或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物 学过程中， 起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的 激活，将 DNA 链在核小体间连接区切成缺口，使核内DNA 断裂成小片断。在组织细胞原位 DNA 切口处 可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素 dUTP，即 TUNEL  (Terminal  deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)，然后通过与过氧化物酶缀合卵白素(Peroxidase  conjugated avidin)的反应，由二氨基联苯胺(diaminobenzidine ，DAB)作用显示为棕色(过氧化物酶活性)。

用户自备

小型染色缸：用于切片的清洗操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

甲基绿复染试剂盒(G&VS40010)：用于细胞染色后的复染

实验步骤

在染色前， 将－20℃冰箱里的试剂盒中 显色液 A (Reagent F) 置入冰槽里融化， 然后移取XXX微升显色液 A  (Reagent F) 和XXX毫升 显色液 B  (Reagent G) 到 2 毫升离心管，充分混匀，标记为 显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：

一、样品预处理

1 ．取出XXX片待测的冰冻组织切片

2 ．室温下，小心加上 200 微升 清理液(Reagent A) 在切片上，铺满样品表面

3 ．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

4 ．小心加上XXX微升 固着液(Reagent B)，铺满整个样品表面

5 ．室温下孵育XXX分钟

6 ．小心移去切片上的 固着液(Reagent B)

7 ．室温下，将切片置入XXX毫升 清理液(Reagent A) 中，孵育 2 分钟

8 ．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

9 ．小心加上XXX微升 封阻液(Reagent C)，铺满整个样品表面

10．室温下孵育XXX分钟

11．室温下，将切片置入XXX毫升 清理液(Reagent A) 中，孵育   分钟

12．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

二、 断点标记处理

13．小心加上XXX微升酶标液(Reagent D)，铺满整个切片样品表面

14．在 37℃湿润的培养箱里，孵育 1 小时，保持湿润，避免干燥

15．小心移去切片上的 酶标液(Reagent D)

16．室温下，小心将切片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中孵育   分钟

17．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

三、样本染色处理

18．小心加上XXX微升 染色液(Reagent E) 在切片上，铺满整个切片样品表面

19．室温下孵育XXX分钟，避免光照

20．小心移去切片上的 染色液(Reagent E)

21．室温下，小心将切片置入XXX毫升清理液(Reagent A) 中孵育XXX分钟

22．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

23．小心加上XXX微升含有 显色液 A  (Reagent  F) 和 显色液 B  (Reagent  G) 的显色工作液，铺满整个切片样品表面

24．室温下孵育XXX至XXX分钟，或直至样本出现棕褐色

25．小心移去切片上含有 显色液 A(Reagent F)和 显色液 B(Reagent G)的 显色工作液

26．室温下，小心将切片置入XXX毫升 清理液(Reagent A) 中浸泡5 秒

27．小心移去切片上的 清理液(Reagent A)

28．放上盖玻片或封片

29．(选择步骤)进行甲基绿复染(建议使用甲基绿复染试剂盒－G&VS40010)

30．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色

注意事项

1．本产品为 10 次操作

2．操作时，须戴手套

3．封阻液(Reagent C) 达到 100％封闭效果，超过双氧水封闭效果

4．本产品为生物素标记，超过荧光素标记强度 1000 倍

5．本产品无需 POD 转换，直接在光学显微镜下观察，既方便，又确保信号不受影响

6．酶标液(Reagent D) 严禁反复冻融

7．清理液(Reagent A) 50 毫升置于小型染色缸里，可重复使用

8．所有操作在室温下进行，除操作中规定之外

9．每次更换试剂溶液时，保持样品表面基本晾干：可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉

10．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

11．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

12．本公司提供系列细胞凋亡试剂产品

13．本公司提供 TUNEL 分析外包服务

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能长qi稳定

2 ．本产品经鉴定显色清晰

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。