吖啶橙（acridine orange）细胞凋亡染色试剂是一种旨在通过荧光染料吖啶橙（Acridine Orange）与DNA特异性结合，呈现绿色，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。可以被用于细胞周期、细胞凋亡、细胞流式仪分析等研究。产品严格无菌，即到即用，荧光清晰，操作简捷，性能稳定。

技术背景

吖啶橙（Acridine Orange），分子式为C17H20CIN3，分子量为301.82，是核酸特异性染料，为膜通透性，活细胞和死细胞均能染色。通过嵌入（intercalation）或静电吸引（electrostatic attraction），与双链DNA形成复合物，即1个分子结合3个碱基，而呈现绿色荧光（激发波长502nm散发波长525nm）；或与单链DNA或RNA结合，即1个分子结合1个磷酸基团，而呈现桔红色荧光（激发波长460nm，散发波长650nm）。 在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。 

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

染色液（Reagent B）微升

产品说明书1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，用铝箔封裹，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效bao证6月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离

完quan细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理

15毫升锥形离心管：用于细胞收集的容器

1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器

微型台式离心机：用于细胞收集的操作

倒置荧光显微镜：用于观察细胞核形态

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

一、 直接法

1． 准备1个细胞培养12孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）

2． 小心抽去细胞培养液

3． 轻轻沿着孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心抽去xx毫升 清理液（Reagent A）

5． 小心加入xx微升清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

6． 加入xx微升染色液（Reagent B） 

7． 室温下孵育60分钟，避免光照（或37℃培养箱里孵育20分钟）

8． 小心抽掉染色液

9． 轻轻沿着孔壁加入xx微升清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

10． 小心抽去清理液（Reagent A）

11． 重复实验步骤9至10一次

12． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面

13． 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长500nm，散发波长530nm（细胞核呈现绿色）

二、 间接法

1． 准备1个细胞培养12孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）

2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）

3． 加入xx毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心移出xx毫升 清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）

5． 加入500微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面

6． 放进37℃培养箱孵育1分种

7． 轻轻手击震动培养板，使细胞脱落

8． 加入1毫升用户自备的wan全细胞培养液

9． 移入15毫升锥形离心管

10． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g

11． 小心抽去上清液

12． 加入xx微升清理液（Reagent A）

13． 用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群

14． 转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管

15． 加入xx微升染色液（Reagent B） 

16． 轻度涡旋震荡2秒

17． 室温下孵育60分钟，避免光照（或37℃培养箱里孵育20分钟）

18． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

19． 小心抽去上清液

20． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

21． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

22． 小心抽去上清液

23． 重复实验步骤20至22一次

24． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

25． 移出5微升到载玻片上，放上盖玻片

26． 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长500nm，散发波长530nm（细胞核呈现绿色）

27． 或即刻进行细胞流式仪分析：激发波长488nm，观察50000个细胞以上

注意事项

1． 本产品为50次（8个12孔细胞培养板）操作

2． 所有操作均须无菌状态下进行

3． 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞；同时要确保足够的细胞数

4． 可用35mm培养皿、6孔培养板或25cm²细胞培养瓶操作，相应增加染色液的用量。但12孔培养板为理想选择

5． 操作时，须戴手套

6． 孵育时，须避免光照

7． 建议细胞染色完成后，即刻进行分析；若暂不观察，可保存在4℃冰箱里，但不宜超过1周

8． 细胞核呈现多个散在块状结构，为细胞凋亡

9． 细胞流式仪分析前，须混匀内容物

10． 细胞流式仪分析，细胞检测量不得少于10000个

11． 告知流式仪技术员有关细胞类型

12． 本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10023.4吖啶橙（acridine orange）细胞凋亡染色试剂盒50次

G&VS10023.4A清理液（Reagent A）毫升

G&VS10023.4B 染色液（Reagent B）毫升

G&VS12024胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液毫升

G&VS12052 DMEM完quan细胞培养基毫升

试剂盒订购信息

原创作者：上海极威生物科技有限公司