1． 将克隆液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出）

2． 放进50℃恒温水浴

3． 移出xx毫升预热的高养液（Reagent B）到50毫升锥形离心管

4． 移出xx毫升克隆液（Reagent A）到50毫升锥形离心管

5． 轻度涡旋震荡或用手摇动锥形离心管，充分混匀

6． *快速度分别移入3毫升（每个3毫升）到10个25cm²细胞培养瓶

7． 用手轻轻抖动，铺满整个底面，避免气泡产生

8． 置于室温下至少2小时，使胶体凝固

9． 准备1瓶25cm²或75cm²细胞培养瓶的待测细胞，清洗，脱落，计数

10． 移出1毫升（总量为2500个细胞）到15毫升锥形离心管

11． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g

12． 小心抽去上清液

13． 加入xx毫升预热的中养液（Reagent C），用枪头上下轻柔抽吸混匀（注意：用户可以加入细胞因子、筛选药物等）

14． 加入xx微升克隆液（Reagent A），用枪头上下轻柔抽吸混匀

15． *快速度全部移入到1个25cm²细胞培养瓶里，置于已凝固的胶体上面

16． 用手轻轻抖动，铺满整个底面，避免气泡产生

17． 置于室温下至少2小时，使胶体凝固

18． 放进37℃二氧化碳细胞培养箱孵育

19． 次日，轻轻加入xx毫升低养液（Reagent D）在胶体上面（注意：用户可以加入细胞因子、筛选药物等）

20． 1周后，再次加入xx毫升低养液（Reagent D）在胶体上面

21． 2周后，在倒置显微镜下观察细胞：细胞集落形成能力和效率（Clonogenicity/Efficiency），包括细胞集落数目、细胞集落大小，以及贴壁非依赖型生长等

22． （选择步骤）小心抽去低养液（Reagent D）

23． （选择步骤）用细胞刮脱棒小心刮落含有细胞集落的中养层

24． （选择步骤）用1000微升枪头（翦去尖端部分）吸出细胞集落

25． （选择步骤）加入到25cm²细胞培养瓶

26． （选择步骤）加入3毫升用户自备的wan全细胞培养液

27． （选择步骤）用5毫升移液管抽吸，充分打碎细胞集落

28． （选择步骤）放进37℃二氧化碳细胞培养箱继续孵育

二、细胞培养板（12孔板）操作

1． 将克隆液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出）

2． 放进50℃恒温水浴

3． 移出xx毫升预热的高养液（Reagent B）到50毫升锥形离心管

4． 移出xx毫升克隆液（Reagent A）到50毫升锥形离心管

5． 轻度涡旋震荡或用手摇动锥形离心管，充分混匀

6． *快速度分别移入1.5毫升（每孔1.5毫升）到12孔细胞培养板的每个孔里

7． 用手轻轻抖动，铺满整个底面，避免气泡产生

8． 置于室温下至少2小时，使胶体凝固

9． 准备1瓶25cm²或75cm²细胞培养瓶的待测细胞，清洗，脱落，计数

10． 移出1毫升（总量为2500个细胞）到15毫升锥形离心管

11． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g

12． 小心抽去上清液

13． 加入xx毫升预热的中养液（Reagent C），用枪头上下轻柔抽吸混匀（注意：用户可以加入细胞因子、筛选药物等）

14． 加入xx微升克隆液（Reagent A），用枪头上下轻柔抽吸混匀

15． *快速度全部移入到12孔细胞培养板的1个孔里，置于已凝固的胶体上面

16． 用手轻轻抖动，铺满整个底面，避免气泡产生

17． 置于室温下至少2小时，使胶体凝固

18． 放进37℃二氧化碳细胞培养箱孵育

19． 次日，轻轻加入xx微升低养液（Reagent D）在胶体上面（注意：用户可以加入细胞因子、筛选药物等）

20． 1周后，再次加入xx微升低养液（Reagent D）在胶体上面

21． 2周后，在倒置显微镜下观察细胞：细胞集落形成能力和效率（Clonogenicity/Efficiency），包括细胞集落数目、细胞集落大小，以及贴壁非依赖型生长等

22． （选择步骤）小心抽去低养液（Reagent D）

23． （选择步骤）用细胞刮脱棒小心刮落含有细胞集落的中养层

24． （选择步骤）用1000微升枪头（翦去尖端部分）吸出细胞集落

25． （选择步骤）加入到25cm²细胞培养瓶或6孔细胞培养板的1个孔里

26． （选择步骤）加入3毫升用户自备的wan全细胞培养液

27． （选择步骤）用5毫升移液管抽吸，充分打碎细胞集落

28． （选择步骤）放进37℃二氧化碳细胞培养箱继续孵育