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技术文章

细胞TUNEL荧光测定试剂盒产品说明书

阅读次数:7304次 发布时间:2024/2/5 9:39:57

细胞TUNEL荧光测定试剂盒

主要用途

细胞TUNEL荧光测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法,包括固着、封阻、通透等完整步骤,从生长在载玻片上的新鲜培养细胞中探寻DNA断点,即运用修饰过的核苷酸,在末端脱氧核糖核酸转移酶TdT的帮助下,DNA单链或双链上断点处的3’末端进行荧光素标记,原位探测和定量分析单细胞水平的DNA降解状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。各种人体、动物、植物等培养细胞DNA降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌,即到即用,反应敏感,操作简捷,性能稳定。

技术背景

细胞凋亡,或细胞程序性死亡,在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中,起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的激活,DNA链在核小体间连接区切成缺口,使核内DNA断裂成小片断在组织细胞原位DNA切口处可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素dUTP,即TUNELTerminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling),然后通过与荧光素缀合卵白素(FITC conjugated avidin)的反应,显示绿色荧光(激发波长488nm,散发波长530nm)。

产品内容

清理液(Reagent A                                毫升

固着液(Reagent B                                毫升

封阻液(Reagent C                                微升

通透液(Reagent D                                微升

酶标液(Reagent E                                微升

荧光液(Reagent F                                微升

产品说明书                                                 1

保存方式

保存封阻液(Reagent C)、通透液(Reagent D)、酶标液(Reagent E)和荧光液(Reagent F)在-20℃冰箱里,严格避免反复冻融,其余的保存在4℃冰箱里;荧光液(Reagent F),避免光照;有效bao6

用户自备

小型染色缸:用于载玻片的清洗操作

(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞染色后观察分析

特别注意

1.酶标液(Reagent E)不能在室温下冻融,而必须在冰槽里冻融,冻融后即刻使用;严禁反复冻融;考虑分装,以备下次使用

2荧光液(Reagent F)避免光照

3.每次移取试剂,须更换枪头,以免污染母液,影响结果

实验步骤

一、细胞预处理

1. 准备好待测的生长在载玻片上的培养细胞

2. 小心抽去细胞培养液

3. 小心加上xx微升清理液(Reagent A在载玻片上,铺满细胞样品表面

4. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

5. 小心加上xx微升固着液(Reagent B,铺满整个样品表面

6. 室温下孵育30分钟

7. 小心移去载玻片上的固着液(Reagent B

8. 室温下,将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中,孵育2分钟

9. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

10. 小心加上xx微升封阻液(Reagent C,铺满整个样品表面

11. 室温下孵育30分钟

12. 室温下,将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中,孵育5分钟

13. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

14. 小心加上xx微升通透液(Reagent D,铺满整个样品表面

15. 置于冰槽里,孵育3分钟

16. 室温下,将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中,孵育5分钟

17. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

二、断点标记处理

1. 小心加上xx微升酶标液(Reagent E,铺满整个载玻片样品表面

2. 37℃湿润的培养箱里,孵育1小时,保持湿润,避免干燥

3. 小心移去载玻片上的酶标液(Reagent E

4. 室温下,小心将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分钟

5. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

三、样本染色处理

1. 小心加上xx微升荧光液(Reagent F在载玻片上,铺满整个载玻片样品表面

2. 室温下孵育30分钟,避免光照

3. 小心移去载玻片上的荧光液(Reagent F

4. 室温下,小心将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分钟

5. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

6. 放上盖玻片或封片

7. 即刻在(共聚焦)荧光显微镜下(激发波长488nm, 散发波长530nm观察:阳性细胞呈现绿色荧光

注意事项

1. 本产品为10次操作

2. 操作时,须戴手套

3. 封阻液(Reagent C达到100%封闭效果,超过双氧水封闭效果

4. 酶标液(Reagent E严禁反复冻融

5. 清理液(Reagent A50毫升置于小型染色缸里,可重复使用

6. 所有操作在室温下进行,除操作中规定之外

7. 每次更换试剂溶液时,保持样品表面基本晾干:可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉

8. 试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满样品表面

9. 染色完成后,即刻进行荧光显微镜观察

10. 本公司提供系列细胞凋亡试剂产品

质量标准

1.本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定荧光清晰

使用cheng

极威生物秉着信誉至上、客户满意、质量cheng的宗旨为我们的用户提供you产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,bao说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

订购信息

单组分订购信息

编号             名称                   规格

G&VS10022.4       细胞TUNEL荧光测定试剂盒         10/20

G&VS10022.4A    清理液(Reagent A             毫升

G&VS10022.4B    固着液(Reagent B             毫升

G&VS10022.4C    封阻液(Reagent C             毫升

G&VS10022.4D    通透液(Reagent D             毫升

G&VS10022.4E     酶标液(Reagent E             毫升

G&VS10022.4F    荧光液(Reagent F             毫升

 

 

试剂盒订购信息

 

产品编号

名称

规格

G&VS10022.1

细胞TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒

10/20

G&VS10022.2

冰冻组织切片TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒

10

G&VS10022.3

石蜡组织切片TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒

10

G&VS10022.4

细胞TUNEL荧光法(Fluorescein)测定试剂盒

10

G&VS10022.5

冰冻组织切片TUNEL荧光法(Fluorescein)测定试剂盒

10

G&VS10022.6

石蜡组织切片TUNEL荧光法(Fluorescein)测定试剂盒

10

G&VS10022.7

细胞TUNEL比色法定量检测试剂盒

10/50

 

原创作者:上海极威生物科技有限公司

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